從組織到單細胞:杜恩斯勻漿器的精細化應用指南
更新時間:2025-12-25 點擊次數:10次
杜恩斯勻漿器憑借其溫和的機械破碎原理,成為細胞器分離、核酸提取等實驗的核心工具。其由磨砂玻璃管與配套研磨杵組成,通過手動推拉旋轉產生剪切力,實現組織或細胞的精準破碎。杜恩斯勻漿器尤其適用于肝臟、腦組織等軟質樣本,以及培養細胞的勻漿處理,能有效保留細胞核、線粒體等亞細胞結構完整性。

一、操作流程:四步實現高效勻漿
1.樣本預處理:將新鮮組織(如小鼠肝臟)切成1-3mm3小塊,或直接取培養細胞沉淀,置于冰上預冷。例如,在RNA提取實驗中,需立即用冰冷PBS清洗組織以抑制RNase活性。
2.勻漿器準備:選擇與樣本量匹配的規格(如10ml或30ml玻璃勻漿器),安裝配套的“松型”研磨杵。部分實驗需預裝裂解液(如CER I試劑),體積通常為樣本重量的5-10倍。
3.勻漿操作:將樣本轉移至玻璃管中,手動勻速推拉研磨杵20-30次。例如,在果蠅頭部核蛋白提取實驗中,需在冰上勻漿至溶液均一,避免局部過熱導致蛋白變性。
4.離心分離:將勻漿液轉移至離心管,4℃條件下以2000-16000g離心5-10分鐘,根據實驗需求分離上清(細胞質提取物)或沉淀(細胞核/線粒體)。
二、關鍵優勢與注意事項
該設備通過可調節的研磨力度實現“溫和破碎”,避免高速離心或超聲處理導致的結構損傷。例如,在痘苗病毒純化實驗中,杜恩斯勻漿器與蔗糖梯度離心結合,可高效分離病毒顆粒與細胞碎片。但需注意:操作全程需冰浴以維持低溫環境;研磨杵需定期更換以防止交叉污染;硬質組織需先用碎肉機預處理。